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玉米黄烷酮-3-羟化酶原核表达条件对香橙素生成量的影响
《食品与发酵工业 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：香橙素是类黄酮代谢途径中重要的中间化合物,黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)能以柚皮素为底物催化C3位接羟基从而生成香橙素.为实现香橙素绿色发展,该研究利用微生物法,对来自玉米的Zmf3h构建大肠杆菌原核表达系统后诱导ZmF3H蛋白表达.通过发酵实验验证ZmF3H在胞内可溶性表达并成功催化生成香橙素.为提高香橙素产量,对蛋白表达阶段的菌体密度、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导剂浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行优化实验.单因素试验结果表明各实验组分别在菌种密度OD600=0.8~1.0,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导温度在23℃,诱导8 h时可明显提高香橙素生成量,综合各单因素优化条件进行实验验证后发现香橙素生成量为(32.27±1.98)mg/L,与初始条件相比提高了60.39%.
关键词： 香橙素;黄烷酮-3-羟化酶;原核表达;表达条件优化
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柑橘香橙素生成途径关键酶黄烷酮-3-羟化酶特性分析及原核表达
《食品科学技术学报 》 2021
摘要：香橙素是柑橘类黄酮的重要组成,黄烷酮-3-羟化酶是香橙素生成途径中的关键作用酶。对黄烷酮-3-羟化酶的特点进行总结与分析并在大肠杆菌中进行表达。首先从NCBI数据库筛选了来自柑橘、陆地棉、玉米、水母雪莲和欧芹的5种f3h,对其进行理化性质、蛋白质二三级结构、序列比对等生物信息学分析并以大肠杆菌为宿主进行表达。发现5种来源的f3h,其基因开放阅读框为1 032～1 119 bp,编码343～372个氨基酸,蛋白分子质量为38.89～41.45 kDa,理论等电点在5.43～5.96,且不同物种F3H的理化性质、结构域和蛋白质结构也有一定的相似性。通过构建大肠杆菌表达体系发现:黄烷酮-3-羟化酶均能进行原核表达,除去来源于水母雪莲的F3H未检测到香橙素的生成,其余4种F3H均能将柚皮素转化为香橙素且产物生成量不同,其中ZmF3H生成量最高达20.12mg/L。
关键词： 柑橘 黄烷酮-3-羟化酶 生成途径 特征分析 原核表达
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